ADN recombinante natural y artificial

ADN recombinante natural

Existen tres mecanismos de recombinación génica en bacterias: conjugación, transformación y transducción. Si nos referimos a la conjugación, consiste en que se realiza contacto físico entre una célula donante y una célula receptora mediante transferencia de un plásmido. Los plásmidos en este caso, actúan como vectores de ADN, y su importancia radica en dan a la bacteria resistencia a los antibióticos porque son los portadores de genes. (1)

ADN recombinante artificial de la SORDERA

El síndrome de Laron ocurre por variaciones de la GH y entre sus factores de riesgo está la otitis recurrente con propensión a sufrir sordera. Para el tratamiento, se emplea la Mecasermina, que es un factor de crecimiento tipo 1 humano (IFG-1), producido por tecnología ADN recombinante, cumple la función de mediador de crecimiento a nivel hormonal y produce efectos metabólicos para el crecimiento tisular y óseo. (2)

T: Influencia de la Mecasermina como tratamiento en pacientes con Síndrome de Laron en Ecuador
O: Determinar y especificar la influencia del fármaco Mecasermina como tratamiento en pacientes con Síndrome de Laron
G: En base a secuencia de polipéptidos, se clonó en pET15b.
ER: NcoI y BamHI
EL: T4-ADN ligasa
V: Vector de Expresión pET15b y Vector Recombinante puc57
CR: Procariota Escherichia coli
MTG: Transformación por conjugación bacteriana
MIC: Método de cultivo, Western blot, Electroforesis en gel de agarosa (3)

Referencias bibliográficas

1. Wally N, Schneider M, Thannesberger J, Kastner MT, et al. Plasmid DNA contaminant in molecular reagents. Scientific Reports [Internet]. 2019 Feb 7 [citado 2021 Ago 4];9(1). Disponible en: https://www.nature.com/articles/s41598-019-38733-1

2. Guevara Luna MS & Roche Triviño JM. Influencia de la mecasermina como tratamiento en pacientes con síndrome de Laron en Ecuador. Ugeduec [Internet]. 2021 [cited 2021 Jul 24]. Disponible en: http://repositorio.ug.edu.ec/handle/redug/53784

3. Jafari S, Babaeipour V, Seyedi H, et al. Recombinant production of mecasermin in E. coli expression system. Research in pharmaceutical sciences [Internet]. 2014 [citado 2021 Jul 29];9(6):453–61. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4326983/

Técnicas moleculares de secuenciación de Ascariasis

Para la secuenciación de muestras de Ascaris lumbricoides se desarrolló un método de extracción de ADN modificado, basándose en los métodos de Fenol/Cloroformo y Qiagen. Para las cinco muestras de la línea germinal basados ​​en cox-1, el ADN debía extraerse del útero, el oviducto o también del ovario del helminto. Luego se secuenciaron estas muestras de ADN del A. lumbricoides utilizando la secuenciación de extremos emparejados de lectura corta de Illumina HiSeq 2500. El ADN se cuantificó mediante UV Spec y Picogreen. La secuenciación se realizó para obtener una profundidad genómica mínima de cobertura 20X para cada muestra. (1)

   

Referencias bibliográficas
1. Easton A, Shenghan Gao, Lawton SP, Sasisekhar B, Asis K, Dahlstrom E, et al. Molecular evidence of hybridization between pig and human Ascaris indicates an interbred species complex infecting humans [Internet]. eLife. eLife Sciences Publications, Ltd; 2020 [citado 2021 Jul 16]. Disponible en: https://elifesciences.org/articles/61562#sa2

Prueba PCR para la Ascariasis

Tema: PCR cuantitativa (qPCR) y PCR digital (dPCR) para la detección de huevos de Ascaris lumbricoides en agua recuperada

Objetivo: Detectar la cantidad de huevos de A. lumbricoides en agua recuperada mediante el uso de qPCR y dPCR para determinar si es factible la reutilización del agua y evitar los riesgos de infección humana

Muestra: Agua dulce, suelo y aguas residuales

Ácido Nucleico a ser extraído: ADN genómico bacteriano

Gen o Secuencia a amplificar: Los cebadores específicos fueron Alum96F y Alum183R, que amplificaron el fragmento de 89 pb de la secuencia de ITS-1

PCR: 

qPCR (PCR cuantitativa)

95°C - 10 minutos

95°C - 10 segundos         (40 ciclos)

60°C - 40 segundos

dPCR (PCR digital)

95°C - 10 minutos

60°C - 2 minutos           (40 ciclos)

98°C - 30 segundos

72°C - 2 minutos

Sensibilidad y Especificidad Analítica:

Visualización: Electroforesis

Referencias bibliográficas

1. Acosta L, Trinidad AB, Bornay FJ, et al. Quantitative PCR and Digital PCR for Detection of Ascaris lumbricoides Eggs in Reclaimed Water. BioMed Research International [Internet]. 2017 [citado 2021 Jul 9];2017:1–9. Disponible en: https://doi.org/10.1155/2017/7515409

Alteraciones de la Epigenómica en la Ascariasis

El aumento de la acetilación de histonas en el ADN en genes de clave tipo 2 se han asociado con un aumento de los niveles de IgE frente a los alérgenos de Ascaris lumbricoides. La exposición a estos alérgenos producidos por el helminto (ABA-1), induce cambios epigenéticos en las células inmunitarias que afectan el inicio y mantenimiento de los fenotipos inmunitarios. En el estudio se detectó una asociación entre los niveles de acetilación H3 y H4 en el LIG4/ABHD13 en el locus 13q33 con la carga total de huevos de Ascaris. Se cree que papel de la IgE en la inmunidad protectora es que la IgE puede desempeñar un papel importante en la reducción de la carga de huevos durante la ascariasis. También determina el papel de la acetilación de H4 en la expresión de CHI3L1 revela que se modifica al entrar en contacto con las larvas de Ascaris. (1)

Referencias bibliográficas

1. Zakzuk J, Acevedo N, Harb H, et al. IgE Levels to Ascaris and House Dust Mite Allergens Are Associated With Increased Histone Acetylation at Key Type-2 Immune Genes. Frontiers in Immunology [Internet]. 2020 Apr 28 [citado 2021 Jul 2];11. Disponible en: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.00756